因業(yè)務調(diào)整，部分個人測試暫不接受委托，望見諒。

小鼠銀屑病模型測定方法與應用

簡介

銀屑病（Psoriasis）是一種慢性炎癥性皮膚病，以表皮過度增生、免疫細胞異常浸潤及炎癥因子釋放為特征。其發(fā)病機制涉及遺傳、免疫和環(huán)境因素的復雜相互作用。由于人體研究的倫理限制和病理樣本獲取難度，建立可靠的小鼠銀屑病模型成為研究疾病機制和藥物開發(fā)的關鍵手段。

小鼠銀屑病模型通過化學誘導（如咪喹莫特）、基因編輯（如STAT3過表達）或免疫調(diào)節(jié)（如IL-23注射）等方式模擬人類銀屑病的病理特征，包括紅斑、鱗屑、表皮增厚及Th17細胞介導的炎癥反應。這些模型為靶向藥物篩選、免疫調(diào)控通路研究及新型療法評估提供了重要平臺。

檢測項目及簡介

1. 皮膚組織病理學評估（H&E染色）

   • 目的：觀察表皮增生、角化不全及真皮炎癥細胞浸潤程度。
   • 方法：取小鼠背部或耳部皮膚組織，經(jīng)固定、包埋、切片后，進行蘇木精-伊紅（H&E）染色，顯微鏡下分析角質(zhì)層厚度、顆粒層缺失及微膿腫形成。

2. 免疫組織化學（IHC）檢測炎癥標志物

   • 目的：定位并定量分析炎癥相關蛋白（如IL-17、TNF-α、Ki-67）。
   • 方法：組織切片經(jīng)抗原修復后，與一抗孵育，通過辣根過氧化物酶（HRP）或熒光二抗顯色，評估目標蛋白的表達水平。

3. 血清或組織勻漿中細胞因子檢測

   • 目的：量化促炎因子（IL-17A、IL-23、IFN-γ）水平。
   • 方法：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）或流式細胞術(shù)（CBA技術(shù)）檢測樣本中細胞因子濃度。

4. 表皮厚度與表皮細胞增殖率測定

   • 目的：評估表皮過度增生程度。
   • 方法：使用數(shù)字圖像分析軟件（如ImageJ）測量H&E切片中表皮厚度；通過BrdU或EdU標記法檢測角質(zhì)形成細胞增殖活性。

5. 銀屑病面積與嚴重程度指數(shù)（PASI）評分

   • 目的：臨床表型量化分析。
   • 方法：根據(jù)紅斑、鱗屑和浸潤厚度進行0-4分評分，綜合計算模型組與對照組的疾病活動度差異。

檢測的適用范圍

1. 疾病機制研究：解析銀屑病中IL-23/Th17軸、表皮屏障功能障礙等通路的作用。
2. 藥物療效評價：用于局部或系統(tǒng)性藥物（如JAK抑制劑、生物制劑）的篩選及劑量優(yōu)化。
3. 免疫調(diào)節(jié)研究：評估特定免疫細胞（如Treg、γδ T細胞）對疾病進展的影響。
4. 基因治療與生物標志物開發(fā)：驗證CRISPR/Cas9基因編輯或RNA干擾療法的效果，并探索潛在診斷標志物。

檢測參考標準

1. GB/T 35823-2018《實驗動物 動物實驗通用要求》
   • 規(guī)范動物倫理審查、實驗操作及福利保障。
2. GB/T 39649-2020《實驗動物 皮膚刺激性試驗》
   • 指導皮膚病理樣本采集與刺激性評估方法。
3. YY/T 1217-2013《醫(yī)用免疫分析儀》
   • 規(guī)定ELISA、流式細胞儀等設備的性能要求與校準標準。

檢測方法及相關儀器

1. 皮膚組織病理學分析

   • 步驟：
     1. 取模型小鼠皮損組織，4%多聚甲醛固定24小時；
     2. 梯度乙醇脫水，石蠟包埋后切片（厚度4-5 μm）；
     3. H&E染色，中性樹膠封片；
     4. 光學顯微鏡（如Olympus BX53）觀察并拍照。
   • 關鍵儀器：石蠟切片機（Leica RM2235）、顯微鏡成像系統(tǒng)（Nikon DS-Ri2）。

2. 免疫組織化學檢測

   • 步驟：
     1. 切片脫蠟至水，3% H?O?阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；
     2. 抗原修復（pH6.0檸檬酸鈉緩沖液，微波加熱）；
     3. 10%山羊血清封閉，一抗（如抗IL-17A，1:200）4℃孵育過夜；
     4. HRP標記二抗孵育，DAB顯色，蘇木素復染；
     5. 全自動切片掃描儀（如Hamamatsu NanoZoomer）定量分析。

3. ELISA檢測細胞因子

   • 步驟：
     1. 采集血清或制備組織勻漿，離心取上清；
     2. 按試劑盒（如R&D Systems DuoSet ELISA）說明包被抗體；
     3. 加入樣本和標準品，37℃孵育2小時；
     4. TMB顯色，酶標儀（BioTek Synergy H1）測定450 nm吸光度。

4. 表皮厚度與增殖率分析

   • 工具：ImageJ軟件劃定表皮區(qū)域，自動計算平均厚度；
   • BrdU法：腹腔注射BrdU（50 mg/kg），取組織切片后通過抗BrdU抗體染色，計數(shù)陽性細胞占比。

5. PASI評分實施

   • 標準：由兩名研究者盲法評估，紅斑、鱗屑、浸潤各按0（無）至4（重度）分計，總分0-12分。

結(jié)語

小鼠銀屑病模型結(jié)合病理學、分子生物學及免疫學檢測手段，可系統(tǒng)解析疾病進展并加速治療策略開發(fā)。通過標準化操作（如參考GB/T 35823）和精準檢測（如H&E與ELISA），該模型在基礎研究與轉(zhuǎn)化醫(yī)學中具有不可替代的價值。未來，隨著單細胞測序與空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)的整合，模型的應用深度將進一步拓展。

（字數(shù)：約1450字）