蛋白質(zhì)(protein)是有機(jī)大分子,是構(gòu)成細(xì)胞的基本有機(jī)物和生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者。蛋白質(zhì)在催化生命體內(nèi)各種反應(yīng)進(jìn)行、新陳代謝、抵御外來物質(zhì)入侵及控制遺傳信息等方面都起著重要的作用。蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)是氨基酸序列,通過鑒定氨基酸序列來匹配它的蛋白質(zhì),這是定性研究,是蛋白質(zhì)組學(xué)的基礎(chǔ),也是蛋白質(zhì)組學(xué)的重要技術(shù)之一。
質(zhì)譜一般由離子源(Ion source)、質(zhì)量分析器(Mass analyzer)和離子檢測(cè)器(Detector)三部分組成。傳統(tǒng)的質(zhì)譜僅用于小分子揮發(fā)物質(zhì)的分析,但隨著新的離子化技術(shù)的出現(xiàn),如基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF)和電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)等,質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)為蛋白質(zhì)分析提供了一種新的途徑?,F(xiàn)在蛋白質(zhì)組學(xué)基本研究手段是:以生物質(zhì)譜技術(shù)為核心,對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行大規(guī)模、高通量分離、鑒定和分析。
蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定的基本原理是用蛋白酶將蛋白質(zhì)消化成肽段混合物,經(jīng)MAILDI或ESI等軟電離手段將其離子化,然后通過質(zhì)量分析器將具有特定質(zhì)核比的肽段離子分離開來。通過實(shí)際譜圖和理論上蛋白質(zhì)經(jīng)過蛋白酶消化后產(chǎn)生的一級(jí)質(zhì)譜峰圖和二級(jí)質(zhì)譜峰圖進(jìn)行的比對(duì),進(jìn)行蛋白鑒定。
技術(shù)特點(diǎn)
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高通量、自動(dòng)化程度高、分離能力強(qiáng);
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通用性強(qiáng),可分析蛋白質(zhì)條帶、免疫共沉淀洗脫液、組織提取液、全細(xì)胞裂解液、亞細(xì)胞分離組分等多種形式的樣品。
應(yīng)用領(lǐng)域介紹
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蛋白質(zhì)膠點(diǎn)鑒定
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蛋白質(zhì)膠條鑒定
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蛋白翻譯后修飾位點(diǎn)鑒定
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蛋白N端、C端測(cè)序
http://www.abace-biology.com/protein-identification.htm